Pig Lung Organoid Culture Medium
猪来源的猪肺类器官在病理及基因上高度重现体内组织,可用于疾病建模、机制研究、精准医疗、药敏药筛等方面的运用。猪肺类器官培养基是一种用于快速在体外培养扩增猪肺类器官的试剂。
组成 | 货号 | 规格(100ml) | 规格(500ml) | 保质期 |
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猪肺类器官培养基 | NGH040008-C | 100ml | 500ml | 2~8℃,1Year |
猪肺类器官培养基补充剂A | NGH040008-A | 2×1.5mL | 10×1.5mL | ≤-20℃,1Year |
猪肺类器官培养基补充剂B | NGH040008-B | 1.5mL | 5×1.5mL | ≤-20℃,1Year |
1.配置方式:以配置10mL猪肺类器官完全培养基为例,在9.55mL猪肺类器官基础培养基(NGH040008-C)中加入300uL猪肺类器官培养基补充剂A(NGH040008-A)和150uL猪肺类器官培养基补充剂B(NGH040008-B),彻底混合。注意:完全培养基在2-8"℃下保存不超过4周,配置完需尽快使用;猪肺类器官基础培养基已含有杀菌剂和抗生素,无需额外添加。
2.猪肺类器官基础培养基补充剂A(NGH040008-A)和猪肺类器官基础培养基补充剂B(NGH040008-B)采取冰上解冻或者4℃过夜解冻方案。建议首次收货后在无菌条件下根据个人实验需求对培养基补充剂进行合理分装,并将分装放置于-20℃储存,使用前取出解冻,切忌反复冻融补充剂。
1.组织样品预处理:将组织从组织保存液(NGH030020)中取出,置于60mm的培养皿中,用含1%PS(青素-链霉素)的PBS溶液清洗2-3次,去除表面杂质和污染。清洗完成后,将组织转移至另一个细胞培养皿中备用。
2.样本消化:预处理后的组织用剪刀剪成2-3mm的小块,转移至1.5mLEP管中,并进一步剪碎至靡状(足以通过移液枪头)。随后将切碎的组织转移至15mL离心管中,加入25-50倍组织体积的组织消化液(NGH030021)。置于37℃摇床上进行消化,时间控制在5-70min之间,每5-10min观察一次,直至有细胞团脱落。具体消化时间需根据组织类型和样品情况适当调整。
3.终止消化并收集细胞:消化完成后,加入DMEM(DMEM体积为组织消化液的10倍),充分混匀以终止消化反应。将混合液通过100um细胞筛过滤,收集滤液并在4℃下以200g(rcf) 或120rpm离心 min。离心后弃去上清液,保留沉淀的细胞进行后续实验。*该流程旨在最大限度提高细胞分离效率,同时保护细胞活性,适用于多种组织类型的单细胞或细胞团制备。
4.种胶:根据细胞数量加入一定量猪肺类器官完全培养基(NGH040008)重悬细胞,加入3倍体积的基质胶(NGH030024)混匀,种胶于提前预热的孔板中。放置于37℃培养箱中凝固10-15min,取出加入配置完成的猪肺类器官完全培养基(NGH040008)。